포스파티딜을 함유한 리포좀으로 처리된 대식세포 조정배지의 사람치수세포 분화에 미치는 영향
Effects of conditioned media from phosphatidylserine-liposome-treated macrophages on the differentiation of human dental pulp cells
박희철, 전홍선, 김용준, 양형철,
소속 상세정보
박희철 ( Park Hee-Chul ) - 서울대학교 치의학대학원 치과생체재료과학교실
전홍선 ( Quan Hongxuan ) - 서울대학교 치의학대학원 치과생체재료과학교실
김용준 ( Kim Yong-Joon ) - 서울대학교 치의학대학원 치과생체재료과학교실
양형철 ( Yang Hyeong-Cheol ) - 서울대학교 치의학대학원 치과생체재료과학교실
Abstract
본 연구에서는 포스파티딜세린 (phosphatidylserine)을 함유한 리포좀 (liposome)으로 사람대식세포 (human macrophage, THP-1)를 처리하여 얻어진 조정배지가 사람치수세포 (human dental pulp cell)의 분화에 어떠한 영향을 주는지 평가하였다. 실험을 위해 포스파티딜세린, 포스파티딜콜린 (phosphatidylcholine), 콜레스테롤 (cholesterol)을 2:1:1 의 분자비로 섞은 후, 진공 증발 방법을 통해 리포좀을 제조하였다. 제조된 리포좀을 사람대식세포에 6시간과 24시간 동안 각각 처리하고 얻어진 조정배지를 사람치수세포의 분화실험에 사용하였다. 분화 확인용 실험으로 알칼리 포스파타아제 활성 (alkaline phosphatase activity) 평가, 역전사 중합효소연쇄 반응 (reverse transcriptase polymerase chain reaction, RT-PCR)을 이용한 분화능평가, 알리자린 레드 에스 염색 (alizarin red S staining)을 통한 기질세포 광화 (cell matrix mineralization) 분석을 실행하였다. 실험결과 알칼리 포스파타아제 활성은 조정배지가 전체 배양액의 10% 이상 함유되었을 때 통계적으로 유의하게 증가하였다. 조골세포 분화인자 유전자 (dentin sialophosphoprotein (DSPP), osteocalcin (OCN))들의 발현을 RT-PCR을 통해 확인한 결과 DSPP 와 OCN 모두에서 통계적으로 유의한 차이는 보이지 않았다. 알리자린 레드 에스 염색한 결과 분화조절 배지와 비교하여 조정배지는 유의한 차이를 보이지 않았다. 그러므로, 조정배지를 통한 사람치수세포 분화에 대한 영향은 미약한 것으로 판단되며, 추후 직접적인 세포간 영향 평가가 가능한 방법을 이용한 연구가 요구된다.
This study aimed to examine the effect of phosphatidylserine-treated macrophages (THP-1) on the differentiation of human dental pulp cells. Phosphatidylserine, phosphatidylcholine, and cholesterol were mixed at a molar ratio of 2:1:1, and liposomes were produced via the vacuum evaporation method. Conditioned media (CM) were collected after treating macrophages, with liposomes for 6 and 24h, and were used for differentiating human dental pulp cells. To confirm the differentiation, we performed an evaluation of alkaline phosphatase (ALP) activity, reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR) of dentin sialophosphoprotein (DSPP) and osteocalcin (OCN) gene expressions, and extracellular matrix mineralization assay via alizarin red S staining. There was a statistically significant increase in alkaline phosphatase activity with the conditioned medium containing 10% in the overall culture medium. RT-PCR assay revealed that conditioned media did not increase the mRNA expressions of DSPP and OCN genes. The degree of matrix mineralization was not affected by the conditioned medium. These results confirm a slight effect of the conditioned medium on the differentiation of human dental pulp cells. Future studies may adopt a method in which macrophages and human dental pulp cells are closely co-existed, to evaluate the effect of phosphatidylserine on the interaction between these cell types.
키워드
대식세포; 분화; 사람치수세포; 포스파티딜세린
Differentiation; Human dental pulp cell; Macrophage; Phosphatidylserine
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